小鼠組織特異性基因沉默或誘導新途徑

短發(fā)夾RNA-Short hairpin RNAs (shrnas)是設計為能夠形成發(fā)夾結構的非編碼小RNA分子，短發(fā)夾RNA能夠通過RNA干擾來抑制基因的表達。Thomas Rosenquist’s group和Greg Hannon’s group聯(lián)合研究了在哺乳動物種系細胞中shRNAs的轉(zhuǎn)移導致基因長時間穩(wěn)定沉默的機制。

Rosenquist and colleagues一開始希望用標準的轉(zhuǎn)基因方法，用線性化片段注射入細胞核中產(chǎn)生轉(zhuǎn)基因建成系而獲得在種系細胞中能夠轉(zhuǎn)移基因沉默的小鼠品系，但是嘗試不成功。他們接著選擇了堿基切除修復有關的DNA N-糖基化酶-Neil1作為目標基因，用建立胚胎干細胞的方法來進行。

研究者首先構建了一個針對抑制Neil1基因的shRNA表達載體，將此載體用電穿孔的方法注射入小鼠胚胎干細胞。穩(wěn)定的胚胎干細胞系表現(xiàn)出Neil1蛋白80%的表達降低，這些細胞對離子輻射的敏感度上升了兩倍，這與Neil1的功能喪失是一致的。

研究者將兩個獨立的胚胎干細胞系注射到小鼠囊泡中，構建成為嵌合型小鼠。嵌合小鼠的幾個F1子代中檢測到了種系細胞傳遞的基因沉默。F1小鼠的幾種組織中Neil1蛋白水平和mRNA水平都發(fā)生了降低。

研究者認為shRNA能夠被用來建立特定基因沉默的種系轉(zhuǎn)基因小鼠品系。這個研究為在小鼠中進行組織特異性基因沉默或誘導開辟了新的道路。